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                              吐溫20在WB中的作用是什么?

                              發布時間: 2024-03-20  點擊次數: 265次

                                Western blot 實驗中常用的洗液 TBST 是一種實驗室配制液體,其配方大體相似,其中一種組成成分是 Tween-20,它是一種黃色或琥珀色的透明油狀液體,有特殊的氣味和輕微的苦味。使用移液器吸取時會感覺到一種滯后感。


                                 Tween-20 ,也稱Polyethylene glycol sorbitan monolaurate,中文名為吐溫-20或吐溫20。為非離子型表面活性劑,大白話就是:它的作用就是洗掉非特異性結合的蛋白質。其在 Western blot 實驗里的作用原理如下:它可以通過降低溶液表面張力,使抗體更容易擴散并結合到膜上的目標蛋白,同時減少非特異性結合,從而提高檢測的特異性和信噪比。


                                 在WB洗液里的吐溫是和BSA一樣,對抗原抗體蛋白提供保護作用,同時因為是表面活性劑(司盤加成親水的環氧乙烷基團后的化合物),可以減少抗體對抗原的非特異性作用,用于洗脫未結合的抗體、減少非特異性結合。
                                 如果抗體濃度過高或封閉不充分導致背景過高,可以通過降低抗體稀釋度、增加洗膜次數和Buffer用量,或在Wash Buffer中添加終濃度0.05%的Tween-20來改善。

                                 雖然 WB 是一類基礎實驗,但是基礎并不代表簡單。翻車的主要原因在于 WB 的步驟實在繁瑣:從配置蛋白膠開始,到蛋白電泳、蛋白轉膜、抗體孵育,一整套流程下來花費 1~2 天的時間才能進行最后的顯影。這些環節中但凡有一個出錯,就會導致實驗的失敗。

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